簡析RNA幹擾（rǎo）技術（shù）類97免费人妻在线观看

RNA幹擾技術（RNA interference，以下簡稱RNAi）是一種高度保守的基因沉（chén）默（mò）機製，由小分子RNA介導，通過基因序列特異性方式降解信使RNA（mRNA）或抑製其翻譯。自1998年美國科學家Fire和Mello在線蟲中發（fā）現（xiàn）RNAi現象並因此獲得2006年諾貝爾生理學或醫學獎以來，該技術（shù）已成為基因（yīn）功能研究、藥物開發和（hé）農業生物（wù）技術（shù）的重要工具，特別是隨（suí）著轉基因玉米（mǐ）品種DvSnf7 dsRNA（商（shāng）品名為SmartStax PRO）的成功商（shāng）品化，RNAi97免费人妻在线观看的（de）研（yán）發成為農業病（bìng）蟲害防（fáng）治的熱點。本文簡（jiǎn）要介紹了RNAi97免费人妻在线观看的作（zuò）用機製、關鍵（jiàn）技術控製點（diǎn），以及與化學97免费人妻在线观看的區別，希望能為國內相（xiàng）關工作提供參考。

1 定義與作用機製（zhì）

RNAi是生（shēng）物體內天然的（de）基（jī）因沉默機製（zhì），廣泛存在於植物、動物、真菌等真核生物中，其核心功能（néng）是調（diào）控基因表達和防禦外源核酸（suān）（如病毒）的入侵。RNAi97免费人妻在线观看就是利用（yòng）該沉默機製設計的一種核酸藥物，通過遞送外源（yuán）基因分子進入害蟲或病原體細胞（bāo）內，沉默或幹擾目標生物的靶標基因（需要被（bèi）沉默的（de）內源（yuán）基因），阻斷特定蛋（dàn）白的合成，從而抑製其生長或繁殖。

2 構成與（yǔ）類別

RNAi97免费人妻在线观看發揮（huī）功效需要將外源基因（yīn）分子送（sòng）入目標（biāo）生物體內，因此它的物理構成可以簡單地（dì）概念化為“外（wài）源基（jī）因分子+遞送載體（tǐ）”。

2.1 外源基因（yīn）分子 它是RNAi97免费人妻在线观看的活性成分，是人工（gōng）設計的核（hé）酸分子，用於沉默靶（bǎ）標基因。能夠觸發RNA幹擾的RNA分子有多種類型，雙鏈RNA（dsRNA）、小幹擾RNA（siRNA ）、短發夾（shRNA）為主要類型，其中dsRNA目前已在97免费人妻在线观看領域有成（chéng）功的應用案例。如美國已商品（pǐn）化的轉基因玉米品種（zhǒng）DvSnf7 dsRNA（商品名為SmartStax PRO）的分子類型也是dsRNA，其通用名中的“Dv”是目標害蟲（Diabrotica virgifera）的學名縮寫，“Snf7”是目標害蟲被沉默的靶標基因（Vacuolar protein sorting-associated protein 7）的標準名稱，“dsRNA”是外源基因分子類型。同時OECD也已發布針對dsRNA分子類型97免费人妻在线观看的環境和膳食風險評估指導文件，（表1）。

表1 RNAi 3種分子類型的區別

2.2 遞送（sòng）載體 它（tā）是用於保護、運輸並增強外源（yuán）基因分子進（jìn）入目標生物細胞內的傳遞係統。遞送載體的材（cái）料主要有化（huà）學載體和生物載體兩類（lèi）。化學載體的材質主（zhǔ）要有脂質體、聚合物或無機納米顆粒等。生（shēng）物載體主要有工程微生物載體、病毒樣顆粒和轉（zhuǎn）基因生物（wù）載體等。轉（zhuǎn）基因玉（yù）米品種DvSnf7 dsRNA使用的就是轉基因生物載體。

3 關鍵技術控製點

RNAi97免费人妻在线观看（yào）的研發涉及多個技術環節，但主要是通過靶標（biāo）基（jī）因分析（xī）、外源基因設計（jì）和（hé）遞送係統優化等3個相互關聯的（de）技術閉環，實現其能夠精準（zhǔn）沉默目標害蟲的特定基因，同時不影響非目標生物（如益蟲、作物或哺乳動物）的特異性目標。

3.1 靶標基因（yīn）的分析 作為靶標基因需要同（tóng）時具備必（bì）需性、開放性和高異源性。必需性（xìng）是指被選基因必須是目標生物存活必（bì）需的基因，受幹擾就會致死。開放性是（shì）必須靶向mRNA開放（fàng）區域，避免折疊區（qū），以提升RNA誘導（dǎo）沉默複合體（RISC複合體）結合率。異源性是指不同物種間基因（yīn）序列的差異程度。作為靶（bǎ）標基（jī）因必須是目標生物特有或高（gāo）保守的基因靶點，且在同種群中基因序列高度同源，與非靶標生物的同源基因差異顯著。已商品化的轉基因玉米（mǐ）品種DvSnf7 dsRNA中靶標基因（yīn）Snf7，與同種群鞘翅目昆（kūn）蟲98%同源，但與哺乳動物基因連續匹配僅9 nt。

3.2 外源基因設計 外源基因是誘導靶標基因（yīn）沉（chén）默（mò）的工具，決定這個工具效率的（de）核心要素是互補性與異源性。互補性指外源基因與（yǔ）靶標mRNA在堿基（jī）序列（liè）上的配對匹配程度。匹配度是確（què）保基因沉默效率和特異性的（de）核心指標，不同分子類型的匹配要（yào）求稍有差異，但在種子區和切割位點等核心區通常要（yào）求絕對匹配（pèi）。非核心區允許有限錯配，短鏈的siRNA的可容忍1～2個錯配，長鏈的dsRNA允許≤5%錯配。外源基（jī）因的異（yì）源性是（shì）要保證人工設計（jì）的外源基因與非靶標生物基因的序列有顯著差異，以（yǐ）確保僅（jǐn）靶向目標生物特定基因，不會影響其他基因（yīn），且不會沉默非目標物種（如哺乳動物（wù）、傳粉昆蟲等）。目前（qián），EPA要（yào）求與（yǔ）非靶（bǎ）基因連續匹配≤11 nt，EFSA要（yào）求全基因組相似性＜50%。已商品化的（de）DvSnf7 dsRNA，它的外（wài）源基因分（fèn）子與蜜蜂基因最（zuì）長連（lián）續匹配僅9 nt。

3.3 遞送係統的優（yōu）化 遞送係統功能（néng）是（shì）確保能將外源基（jī）因分子精準送達害蟲或（huò）病原體細（xì）胞內，核心要素是環境穩定性、屏障突破和可控釋放（fàng）。環境穩定性目前（qián）是通過核酸修飾和紫外防護（hù）等措施，延長外源基因分子（zǐ）在植（zhí）物體內和土壤中半（bàn）衰期，以及提高在高溫環境下的活性。屏障突破是通過納米尺寸控製、添（tiān）加表麵活性劑等措施，保證外源（yuán）基（jī）因（yīn）分子能突破（pò）害蟲或病原體體壁或腸壁等多（duō）重生物屏障。可控釋放是通過時間、空間和（hé）劑量等（děng）3個維度，控製外源基因在目（mù）標生物體內（nèi）的精準釋放，以確保外源基因分子（zǐ）濃度僅（jǐn）夠（gòu）沉默靶基因（yīn），不會影響低親和力的非靶標基因。

4 與化學97免费人妻在线观看風險管控的差異

RNAi97免费人妻在线观看因（yīn）其特（tè）異性，決（jué）定了它與化學97免费人妻在线观看在防治範圍（wéi）和（hé）風險評估（gū）側重點上有較（jiào）大區別。

4.1 防治範圍 較之化（huà）學97免费人妻在线观看對農業病蟲害較寬泛的“化學幹預”特點，RNAi97免费人妻在线观看具有精（jīng）準的“信息幹預”特點，因此它在防治範圍上不具備化學97免费人妻在线观看那樣（yàng）跨目級的廣譜防治功能。其原因，一是受基因靶點保（bǎo）守性的限（xiàn）製，如不同目級的昆蟲（如鞘翅（chì）目與鱗翅目）同源基因序列差異都比較大，單一外源基因分子難以同時有效，即使同目級，不同科/屬（shǔ）的昆蟲同源基因也存（cún）在顯著差異。實現有限範圍的多靶點，是當下研究的熱點。二是受遞送係統的限製。不同害蟲或病原體的體壁結構或細胞（bāo）壁結（jié）構都存在差異，目前同一載體在跨種群高效遞送方麵存在技術瓶頸。

4.2 風險評估 RNAi97免费人妻在线观看風險評估技術原理與化學97免费人妻在线观看基本一致，也需從危害識（shí）別、暴（bào）露評估等環節評估其（qí）對生態環境、人體健康的風（fēng）險，它與化學97免费人妻在线观看最大的區別在於需要同時評（píng）價外源基因分子和遞送係統，重點是遞送係統（tǒng）的毒性和脫靶效應。

4.2.1 活性成分（外源基因（yīn）分子） 主（zhǔ）要（yào）評價靶標基因（yīn）特異性、環境歸趨和健康風險，確保對非靶標基因（哺乳動物、傳粉昆蟲等）無交叉活性，降解物的生態風險和通過食物（wù）鏈傳遞的風險可接受。

4.2.2 遞送載體 雖然遞送載體在RNAi97免费人妻在线观看中有點類似化學97免费人妻在线观看的助劑，但在（zài）功能上與化學助劑存（cún）在本質區別，（表（biǎo）2）。

表2 遞送載體與常規農（nóng）藥（yào）助劑的區別

在OECD和EPA的（de）相關規定中（zhōng）對載體材料本身的毒性評（píng）估是風險評估的重點。評估的主要內容（róng）包括：載體材料本身的（de）毒性、環境行為與歸趨、生態毒性、載體-外源（yuán）基因分子複合物特性等。如（rú）是生物載體，需要評估生（shēng）物載體的潛在毒（dú）性，包括評（píng）估載體是否引發宿主的（de）免疫反應（yīng）等。

5 結束語

RNAi97免费人妻在线观看通過精準調控（kòng）基因表達，在農業綠色（sè）防控上展（zhǎn）現出較大（dà）的（de）潛力，但在遞送效（xiào）率和脫靶效應等方麵仍麵臨挑（tiāo）戰。隨著相（xiàng）關技（jì）術的進步，或（huò）將成為化學97免费人妻在线观看的重要補充手段。