簡析RNA幹擾技術類97免费人妻在线观看

RNA幹（gàn）擾技術（RNA interference，以下簡稱RNAi）是一種高度保守的基因沉默機製，由小（xiǎo）分子RNA介導（dǎo），通過基因序列特異性方式降解信使RNA（mRNA）或（huò）抑製其翻譯。自1998年美國科學（xué）家（jiā）Fire和（hé）Mello在線蟲中發現RNAi現象並因此獲得2006年諾貝爾生理學或醫學獎以（yǐ）來，該技術已（yǐ）成為基因功能研究、藥物開發和農業生物技（jì）術的重要工具，特別是隨著轉基因（yīn）玉米品種DvSnf7 dsRNA（商（shāng）品名為SmartStax PRO）的成功商品化，RNAi97免费人妻在线观看的（de）研發成為農業病蟲害（hài）防治的熱點。本文簡（jiǎn）要介紹了RNAi農（nóng）藥的作用機製、關鍵技術控製點，以及與化學97免费人妻在线观看的區別，希望能為國內相關工作提供參考。

1 定（dìng）義與（yǔ）作用機製

RNAi是生物體內（nèi）天然的基因沉默（mò）機製，廣泛存在於植物、動物、真菌等真核生物中，其（qí）核心功能是調控基因表達和防禦（yù）外源（yuán）核酸（如病毒）的入侵。RNAi97免费人妻在线观看就是利用該沉（chén）默機製設計的（de）一種核酸藥物，通過遞送外源基因（yīn）分子進入（rù）害蟲（chóng）或病原體細胞內，沉默（mò）或幹擾目標生物的靶標基（jī）因（需要被沉默的內源基因），阻斷特定蛋白的合成，從而抑製其生長或繁殖（zhí）。

2 構（gòu）成與類別

RNAi97免费人妻在线观看發揮功效需要將外源基因分子送入目標生物體內，因此它的物理構成（chéng）可以簡單地概（gài）念化為（wéi）“外源基因分子+遞送載體（tǐ）”。

2.1 外源（yuán）基（jī）因分子 它是RNAi97免费人妻在线观看（yào）的活性成分，是人工設計的核酸分（fèn）子，用於沉默靶標基因。能夠觸發RNA幹擾的RNA分子有多種類（lèi）型，雙鏈RNA（dsRNA）、小幹擾RNA（siRNA ）、短（duǎn）發夾（shRNA）為主要類型，其中dsRNA目（mù）前已在97免费人妻在线观看領域有成功的應用案例。如美國已商（shāng）品化的轉基因玉米品種DvSnf7 dsRNA（商品名為SmartStax PRO）的分子類型也是dsRNA，其通用名中的“Dv”是（shì）目標害蟲（Diabrotica virgifera）的學名縮寫，“Snf7”是目標害蟲被沉默（mò）的靶標（biāo）基因（Vacuolar protein sorting-associated protein 7）的標準（zhǔn）名稱，“dsRNA”是（shì）外源基因分子（zǐ）類型。同時OECD也已（yǐ）發布針對dsRNA分子類型97免费人妻在线观看的環境和（hé）膳食風險評估指導文件，（表1）。

表1 RNAi 3種分子類型的區別

2.2 遞送載體 它是用於保護、運輸並增強外源基因分（fèn）子進入目標生物（wù）細胞內的傳遞係統。遞送載體的材（cái）料主要有化學載體和生物載體兩類。化學載體的（de）材（cái）質主要有脂質體、聚合物或無（wú）機納米顆粒等。生物載體主要有工程微生物載體、病毒樣顆（kē）粒和轉基因生物載（zǎi）體等。轉基因玉米品種（zhǒng）DvSnf7 dsRNA使用（yòng）的就是轉基因生物載體（tǐ）。

3 關鍵技術控製點（diǎn）

RNAi97免费人妻在线观看的研發涉及多個技術環節，但（dàn）主要是通過（guò）靶標基因分析、外源基因設計（jì）和遞送係統優化等3個相（xiàng）互關聯的技術閉環，實現其能夠精準沉默目標害（hài）蟲的特（tè）定基因，同時不影響非目標（biāo）生物（如益蟲、作（zuò）物或哺（bǔ）乳動物）的特異性目標。

3.1 靶標基因的分析（xī） 作為靶標基因需要同時具備必需性、開（kāi）放（fàng）性和高異源性。必需性是指被選基因必須是目標生物存活必需（xū）的基因，受幹擾就會致（zhì）死。開放性是必須靶向mRNA開放區（qū）域（yù），避免折疊區，以提升RNA誘導沉默複合體（tǐ）（RISC複合體）結合率。異（yì）源性是指不同物種間基因序列的差異程（chéng）度。作為靶標基因必須是目標生物特有或高保守的基因靶點，且在同種群中基因序列高度同源，與非靶標生物的同源基因差異顯著。已商（shāng）品（pǐn）化的轉（zhuǎn）基因玉米品種DvSnf7 dsRNA中靶標基因Snf7，與（yǔ）同種群鞘翅（chì）目昆蟲98%同源，但與哺乳（rǔ）動（dòng）物基（jī）因連續匹配僅9 nt。

3.2 外源基因設計 外（wài）源基因是誘導靶（bǎ）標基（jī）因沉默的（de）工具，決定這個工具效率的核心要素是互補性與（yǔ）異源性。互補性指外源基因與靶標mRNA在堿基序（xù）列上的配對匹（pǐ）配程度。匹配度是確保基因沉（chén）默效率和特異性的核心指標，不同分子類型的匹配要（yào）求稍有差異（yì），但在種子區和切割位點等（děng）核（hé）心區通常要求絕對匹配。非（fēi）核心區允許有限（xiàn）錯配（pèi），短（duǎn）鏈的（de）siRNA的可容忍1～2個錯（cuò）配，長鏈的dsRNA允許≤5%錯配。外（wài）源基因的異源性是要保證人工設計的外源（yuán）基因與非靶標生物基因（yīn）的（de）序列有顯著差異，以確保僅靶向目標生物特定基因，不會影響其他基因，且不會沉默非目標物種（zhǒng）（如哺乳動物、傳粉昆（kūn）蟲等）。目前，EPA要求與（yǔ）非靶基因連續匹配≤11 nt，EFSA要求全基因組相似性＜50%。已（yǐ）商品化的DvSnf7 dsRNA，它的外源基因分子與蜜蜂（fēng）基因最長連續匹配僅9 nt。

3.3 遞送係統的優化 遞送係統功能是確保能將外源基因分子（zǐ）精準送達害蟲（chóng）或病原體細胞內，核（hé）心要素是環（huán）境穩定性、屏障突破和可控釋放。環境（jìng）穩定性目前是通過核酸修飾和（hé）紫外防護等措施，延長外源基因（yīn）分子在植物體內（nèi）和土壤中半（bàn）衰期，以及提高在（zài）高溫環境下的活性。屏障突破是通過納米尺寸控製、添加表（biǎo）麵活性劑等措施，保證外源基因分（fèn）子能突破害蟲或病原體體壁或腸壁等多重生物屏（píng）障。可控釋放是通過（guò）時間、空間和（hé）劑量等3個（gè）維度，控製外（wài）源基因在目標生物體內的精準（zhǔn）釋放，以確保外（wài）源基因分子濃（nóng）度僅夠沉默靶基因，不會影響低親和力的非靶標基因。

4 與化學農（nóng）藥風險管控的差異（yì）

RNAi97免费人妻在线观看（yào）因其特異性，決定了它與化學97免费人妻在线观看在防治範圍和風險評（píng）估側重點上有較大（dà）區別。

4.1 防治範圍 較之化學97免费人妻在线观看對農業病蟲害較寬泛（fàn）的（de）“化學幹預”特點，RNAi97免费人妻在线观看具有精準的“信息幹預”特（tè）點，因（yīn）此它在防治範圍上不具備化學97免费人妻在线观看那樣跨目級的（de）廣譜防治功能。其（qí）原因，一是（shì）受基因靶點保守性的限製，如不同目級的昆蟲（如鞘翅目與鱗翅目）同源基因序列差異都比較大，單一外源（yuán）基因分子難以同時有效，即使（shǐ）同目級（jí），不同科/屬的昆蟲同源基因也存在顯著差異。實現有限範圍的多靶（bǎ）點，是當下研究的熱點（diǎn）。二是受遞送係（xì）統的限製。不同（tóng）害蟲或病原體（tǐ）的（de）體壁結構或細胞壁結構都存在差異，目前同一載體在跨種群高效（xiào）遞送方（fāng）麵存（cún）在技術瓶頸。

4.2 風險評估（gū） RNAi97免费人妻在线观看風險評估技術原理與化（huà）學97免费人妻在线观看基本一致，也需（xū）從危害識別、暴露評估等（děng）環節評估其（qí）對生態環（huán）境、人體健（jiàn）康的風險，它與（yǔ）化學農（nóng）藥最大的區別在於需要同（tóng）時評價外源基因（yīn）分子和遞送係統，重（chóng）點是遞送係統的毒性和脫靶效應。

4.2.1 活性成分（外源基因分子） 主要評價靶標基因特異性、環境歸趨和健康風（fēng）險，確保對非靶標（biāo）基因（哺乳動物、傳（chuán）粉昆蟲等）無交叉活性，降解物的生（shēng）態風險和通過（guò）食物鏈傳遞的風險可接受。

4.2.2 遞送載體 雖然遞送載體在RNAi97免费人妻在线观看中有點類似化學97免费人妻在线观看的助劑，但在功能上與化學助劑存在本質區別，（表2）。

表2 遞送（sòng）載體與常規97免费人妻在线观看助劑的區別

在OECD和EPA的相關規定（dìng）中對（duì）載體材料本身的毒性評估是風（fēng）險評估的重點（diǎn）。評估的主要內容包括：載體材料本身的毒性、環境行為與歸趨、生態毒性、載體-外（wài）源基因分子（zǐ）複合物特性等。如是生物載體，需要評估生物載體的潛在毒性，包括評估載體是否（fǒu）引發宿主的免疫反應等。

5 結束語

RNAi97免费人妻在线观看通過精準調控基因表達，在農（nóng）業綠色（sè）防（fáng）控（kòng）上展現出較大的潛力，但在遞送效率和脫靶效（xiào）應等方麵仍麵（miàn）臨（lín）挑戰。隨（suí）著相關技（jì）術的進步，或（huò）將成為化學農（nóng）藥的（de）重要補充手段。